miRNA 靶向调控 CCR7 抑制结肠癌细胞增殖及侵袭的研究
2017-12-18 11:42:48  作者:林汉利 陈小欢 王晓玲   来源:  阅读:85次

 

科研课题
      2017年 第23卷 第24期

  【摘要】 目的 探讨 miRNA 在调控趋化因子受体 CCR7 表达及对结肠癌细胞增殖及侵袭的影响。方法 利用生物信息学网站 Target Scan、Pictar 和 miRanda,综合文献寻找与 CCR7 基因相互作用的miRNA,综合 3 个数据库和文献的结果选取 5 条 miRNA 分别为 miR-let7、miR-21、miR-98、miR-145、miR-642 研究。使用 PCR 方法扩增含 CCR7 基因 3’-UTR 区序列插入到双酶切的双荧光素酶报告载体中,使用 lipofectamine2000 转染试剂将报告载体和待筛选 miRNA 共转染 293 细胞,双荧光素酶检测试剂盒测定荧光素酶活性。用迁移和 transwell 小室实验检测所预测的 miRNA 对结肠癌 HCT116 细胞转移和侵袭能力的影响。用 Western blotting 检测 miRNA 作用于结肠癌 HCT116 细胞后对 CCR7 蛋白表达的调控。结果 得到含 CCR7 基因 3’-UTR 序列的双荧光素酶报告重组质粒,并用凝胶电泳和基因测序的方法验证。CCR7 基因 3’-UTR 上有 miRNA 的调控作用靶点;双荧光素酶报告显示 miR-let7、miR-21 组比空白对照组 CCR7 基因 3’-UTR 双荧光素酶基因报告载体的荧光素酶活性下降。miR-let7、miR-21 能显著抑制结肠癌 HCT116 细胞迁移和侵袭能力,并且下调 CCR7 蛋白在 HCT116 细胞中的表达。结论 CCR7 基因 3’-UTR 段双荧光素酶基因报告载体构建成功,miRNA(miR-let7 和 miR-21)对 CCR7 有负调控作用。miR-let7 和 miR-21 能抑制 CCR7 蛋白的表达,并抑制结肠癌细胞转移和侵袭能力。
  【关键词】 CCR7 基因;结肠癌;miRNA;双荧光素酶报告系统

  DOI:10.3760/cma.j.issn.1007-1245.2017.24.004
  基金项目:深圳市科创委科技创新项目(JCY20140416094330192);深圳市龙岗区科技发展资金项
目(YLWS20150513163509153)
  518033 深圳,中山大学附属第八医院消化内科(林汉利、陈小欢、王晓玲);518172 
  深圳市耳鼻咽喉研究所 深圳市龙岗区耳鼻咽喉医院(曾浩涛)
  通信作者:曾浩涛,E-mail:zhtdbyyyq@126.com

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